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Vektor kloning Vettori di clonazione Vector de clonació Wektor klonujący 클로닝 벡터 Vector de clonación Cloning vector Klonierungsvektor
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Wektor klonujący, wektor do klonowania – jeden z typów wektora genetycznego. Jest to pomocnicza cząsteczka DNA ułatwiająca produkowanie dużych ilości innego, przyłączonego do niej fragmentu DNA (zwanego wstawką lub insertem). Zawiera charakterystyczny układ sekwencję nukleotydów umożliwiający rozpoczęcie pracy polimerazie DNA, czyli enzymowi kopiującemu całe cząsteczki DNA, jeśli tylko zawierają tę charakterystyczną sekwencję, zwaną miejscem ori. Ein Klonierungsvektor ist ein Vektor, der im Gegensatz zum Expressionsvektor nur zur Klonierung verwendet wird. Los vectores de clonación o vector molecular son moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que llevan insertados mediante técnicas de ADN recombinante.Para que sirva de vector, una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta.También tiene que tener secuencias de reconocimiento que permitan la inserción del fragmento de ADN a clonar. Los vectores que transportan un fragmento insertado se denominan vectores recombinantes. Todo vector de clonación debe contener los siguientes elementos: A cloning vector is a small piece of DNA that can be stably maintained in an organism, and into which a foreign DNA fragment can be inserted for cloning purposes. The cloning vector may be DNA taken from a virus, the cell of a higher organism, or it may be the plasmid of a bacterium. The vector contains features that allow for the convenient insertion of a DNA fragment into the vector or its removal from the vector, for example through the presence of restriction sites. The vector and the foreign DNA may be treated with a restriction enzyme that cuts the DNA, and DNA fragments thus generated contain either blunt ends or overhangs known as sticky ends, and vector DNA and foreign DNA with compatible ends can then be joined together by molecular ligation. After a DNA fragment has been cloned Els vectors de clonació, en anglès: cloning vector, són un petit tros d'ADN agafat d'un virus o un plasmidi d'una cèl·lula o d'un organisme superior, que es poden mantenir de manera estable en un organisme, i dins del qual es pot inserir un fragment d'ADN forà amb intencions d'aconseguir clonació molecular. El vector per tant, conté característiques que permeten, per exemple, si es tracta el vector i l'ADN forà amb un enzim de restricció, enllaçar els fragments junts. Després que un fragment d'ADN hagi estat clonat dins un vector de clonació, pot ser posteriorment dins un altre vector dissenyat per a un ús més específic. Vektor kloning adalah agen pembawa fragmen DNA masuk ke dalam sel makhluk hidup yang berfungsi untuk memperbanyak fragmen DNA. Beberapa vektor kloning yang umum digunakan adalah plasmid, vektor , virus, , , dan . Suatu vektor kloning harus dapat disambungkan atau menyatu dengan fragmen DNA yang ingin ditransfer kemudian dapat dimasukkan ke dalam sel. Di dalam sel tersebut, fragmen DNA akan diperbanyak jumlahnya. Untuk memilih vektor kloning yang cocok dalam penelitian, beberapa hal yang harus dipertimbangkan adalah ukuran fragmen DNA yang akan ditransfer, jumlah salinan, inkompatibilitas (ketidaksesuaian), marka pemilihan (selectable marker) untuk seleksi, situs kloning, dan fungsi khusus dari suatu vektor. I vettori di clonaggio sono particolari molecole di DNA, naturale o anche artificiale, impiegate nelle tecnologie molecolari di clonaggio. Esistono differenti tipi di vettori di clonaggio. I più semplici, e anche i più usati comunemente, sono: 1) Vettori Plasmidici, 2) Vettori Fagici o Batteriofagi, 3) Vettori Cosmidici o Cosmidi.Esistono poi altri tipi di vettori di clonaggio che vengono adoperati per soddisfare esigenze particolari (per esempio i cromosomi artificiali di lievito, conosciuti con l'acronimo YAC, che vengono usati per clonare lunghi segmenti di DNA-oltre 100 ) 클로닝 백터(영어: cloning vector)는 바이러스, 플라스미드 또는 고등생물의 세포에서 얻어진 작은 DNA이다. 이것은 숙주 내에서 안정적으로 유지될 수 있으며, 외부 DNA 조각을 삽입하려는 용도를 가지고 있다. 그러므로 벡터와 외부 DNA를 제한효소 또는 ligase를 처리할 때, 벡터는 DNA를 쉽게 삽입하거나 제거할 수 있는 특징을 가져야한다. 많은 종류의 클로닝 벡터가 있지만, 대부분 플라스미드를 이용한다. 클로닝이 된 vector는 E.coli에서 발현시켜 본다. E.coli내의 클로닝 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 코스미드 그리고 인공박테리아염색체(BACs)가 있다. 그러나 큰 DNA조각이나 효모와 같이 다른 생물의 DNA는 E.coli내에서 안정적으로 유지되지 않는다. 효모의 클로닝벡터는 인공효모염색체(YACs)를 가진다.
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클로닝 백터(영어: cloning vector)는 바이러스, 플라스미드 또는 고등생물의 세포에서 얻어진 작은 DNA이다. 이것은 숙주 내에서 안정적으로 유지될 수 있으며, 외부 DNA 조각을 삽입하려는 용도를 가지고 있다. 그러므로 벡터와 외부 DNA를 제한효소 또는 ligase를 처리할 때, 벡터는 DNA를 쉽게 삽입하거나 제거할 수 있는 특징을 가져야한다. 많은 종류의 클로닝 벡터가 있지만, 대부분 플라스미드를 이용한다. 클로닝이 된 vector는 E.coli에서 발현시켜 본다. E.coli내의 클로닝 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 코스미드 그리고 인공박테리아염색체(BACs)가 있다. 그러나 큰 DNA조각이나 효모와 같이 다른 생물의 DNA는 E.coli내에서 안정적으로 유지되지 않는다. 효모의 클로닝벡터는 인공효모염색체(YACs)를 가진다. Wektor klonujący, wektor do klonowania – jeden z typów wektora genetycznego. Jest to pomocnicza cząsteczka DNA ułatwiająca produkowanie dużych ilości innego, przyłączonego do niej fragmentu DNA (zwanego wstawką lub insertem). Zawiera charakterystyczny układ sekwencję nukleotydów umożliwiający rozpoczęcie pracy polimerazie DNA, czyli enzymowi kopiującemu całe cząsteczki DNA, jeśli tylko zawierają tę charakterystyczną sekwencję, zwaną miejscem ori. Ten proces (będący formą replikacji DNA) zachodzi, gdy wektor wraz z przyłączoną do niego wstawką znajdzie się w komórkach odpowiedniego organizmu (są to komórki gospodarze). Każda komórka gospodarz może wytworzyć wiele kopii wektora lub wektora ze wstawką. Ponadto komórki szybko dzielą się, przez co ogromnie zwiększają stopień powielenia DNA. Wbudowanie wstawki do wektora i wprowadzenie tej hybrydowej cząsteczki do właściwego organizmu jest istotą klonowania DNA. Typowy wektor klonujący zawiera miejsce ori, zapewniające tworzenie w komórkach dużej liczby jego kopii, a także miejsce poliklonalne, czyli skupisko sekwencji służących jako , które ułatwiają rozcięcie wektora i przyłączenie do niego wstawki. Ponadto wektor zawiera zwykle gen selekcyjny, nadający komórkom gospodarzom oporność na jakiś antybiotyk i pełniący funkcje markera transformacji, to znaczy ułatwiający wyszukanie komórek zawierających dany wektor. Dodatkowo wektor do klonowania może zawierać gen reporterowy, ułatwiający odróżnienie komórek zawierających sam wektor od komórek zawierających wektor ze wstawką. Gen reporterowy nadaje komórkom gospodarzowym charakterystyczny wygląd – zwykle niebieską barwę – gdy funkcje „reportera” pełni gen kodujący podjednostkę β-galaktozydazy (enzymu). Jeśli wektor zawiera gen reporterowy, miejsce poliklonalne jest w obrębie części kodującej tego genu. Wbudowanie wstawki do części kodującej genu reporterowego powoduje, że tworzone na jego matrycy białko zawiera wiele dodatkowych aminokwasów i traci swoją typową aktywność. W wyniku tego komórki zawierające wektor ze wstawką, a nie pusty wektor, mają wygląd jak komórki niezawierające wektora, to znaczy tworzą mlecznobiaławe kolonie, ale są oporne na określony antybiotyk, podobnie jak wszystkie komórki zawierające dany wektor (ze wstawką lub bez). Vektor kloning adalah agen pembawa fragmen DNA masuk ke dalam sel makhluk hidup yang berfungsi untuk memperbanyak fragmen DNA. Beberapa vektor kloning yang umum digunakan adalah plasmid, vektor , virus, , , dan . Suatu vektor kloning harus dapat disambungkan atau menyatu dengan fragmen DNA yang ingin ditransfer kemudian dapat dimasukkan ke dalam sel. Di dalam sel tersebut, fragmen DNA akan diperbanyak jumlahnya. Untuk memilih vektor kloning yang cocok dalam penelitian, beberapa hal yang harus dipertimbangkan adalah ukuran fragmen DNA yang akan ditransfer, jumlah salinan, inkompatibilitas (ketidaksesuaian), marka pemilihan (selectable marker) untuk seleksi, situs kloning, dan fungsi khusus dari suatu vektor. A cloning vector is a small piece of DNA that can be stably maintained in an organism, and into which a foreign DNA fragment can be inserted for cloning purposes. The cloning vector may be DNA taken from a virus, the cell of a higher organism, or it may be the plasmid of a bacterium. The vector contains features that allow for the convenient insertion of a DNA fragment into the vector or its removal from the vector, for example through the presence of restriction sites. The vector and the foreign DNA may be treated with a restriction enzyme that cuts the DNA, and DNA fragments thus generated contain either blunt ends or overhangs known as sticky ends, and vector DNA and foreign DNA with compatible ends can then be joined together by molecular ligation. After a DNA fragment has been cloned into a cloning vector, it may be further subcloned into another vector designed for more specific use. There are many types of cloning vectors, but the most commonly used ones are genetically engineered plasmids. Cloning is generally first performed using Escherichia coli, and cloning vectors in E. coli include plasmids, bacteriophages (such as phage λ), cosmids, and bacterial artificial chromosomes (BACs). Some DNA, however, cannot be stably maintained in E. coli, for example very large DNA fragments, and other organisms such as yeast may be used. Cloning vectors in yeast include yeast artificial chromosomes (YACs). Ein Klonierungsvektor ist ein Vektor, der im Gegensatz zum Expressionsvektor nur zur Klonierung verwendet wird. Los vectores de clonación o vector molecular son moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que llevan insertados mediante técnicas de ADN recombinante.Para que sirva de vector, una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta.También tiene que tener secuencias de reconocimiento que permitan la inserción del fragmento de ADN a clonar. Para insertar un fragmento de ADN a un vector, se utiliza una enzima de restricción que se mezcla con fragmentos de ADN producidos con la misma enzima, posteriormente, se adiciona la enzima Fosfatasa Alcalina, la cual es la encargada de evitar la recircularización del vector, ya que adiciona un extremo 3' Fosfato que evita la unión de ambos extremos así como la complementariedad y formación de un enlace fosfodiéster. Inmediatamente se adiciona el ADN que pretende insertarse en el vector, donde uno de los extremos se une por complementariedad y se utiliza una ligasa para generar la unión y su recircularización. Los vectores que transportan un fragmento insertado se denominan vectores recombinantes. Todo vector de clonación debe contener los siguientes elementos: * Origen de Replicación: Es la región que codifica para el inicio de la síntesis de DNA, el cual le da la cualidad de poder replicarse de manera independiente al DNA cromosómico, ya sea en un sistema bacteriano o en un sistema de expresión en levaduras. * Agente de Selección: Son genes contenidos en la secuencia del vector, los cuales le confieren características adicionales al sistema de clonación (bacterias, levaduras, etc.), que permiten la identificación y selección de las clonas recombinantes, es decir, clonas que contienen el fragmento de DNA de interés. Ejemplos de esto son los genes que codifican para la resistencia a antibióticos, como lo son los de resistencia a la ampicilina o a la tetraciclina, o por el contrario, pueden ser marcadores metabólicos como el gen Lac Z, que codifica para la síntesis de la enzima beta galactosidasa o marcadores auxotróficos, como lo es el gen que codifica para la síntesis de histidina (muy utilizado en los sistemas de expresión y clonación en levaduras). * Polilinker o Sitio de Multiclonación: Región contenida dentro de las secuencias de los genes que codifican para los marcadores, que contienen múltiples sitios de restricción, es decir, múltiples sitios de reconocimiento para las enzimas de restricción, que permiten la inserción de los fragmentos de DNA que se desea clonar en un sistema. I vettori di clonaggio sono particolari molecole di DNA, naturale o anche artificiale, impiegate nelle tecnologie molecolari di clonaggio. Esistono differenti tipi di vettori di clonaggio. I più semplici, e anche i più usati comunemente, sono: 1) Vettori Plasmidici, 2) Vettori Fagici o Batteriofagi, 3) Vettori Cosmidici o Cosmidi.Esistono poi altri tipi di vettori di clonaggio che vengono adoperati per soddisfare esigenze particolari (per esempio i cromosomi artificiali di lievito, conosciuti con l'acronimo YAC, che vengono usati per clonare lunghi segmenti di DNA-oltre 100 ) Els vectors de clonació, en anglès: cloning vector, són un petit tros d'ADN agafat d'un virus o un plasmidi d'una cèl·lula o d'un organisme superior, que es poden mantenir de manera estable en un organisme, i dins del qual es pot inserir un fragment d'ADN forà amb intencions d'aconseguir clonació molecular. El vector per tant, conté característiques que permeten, per exemple, si es tracta el vector i l'ADN forà amb un enzim de restricció, enllaçar els fragments junts. Després que un fragment d'ADN hagi estat clonat dins un vector de clonació, pot ser posteriorment dins un altre vector dissenyat per a un ús més específic.
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